2009-2010 sezonu TFF 3. Ligi'ne yükselen son takım Kayseri'de düzenlenen müsabakalar sonunda belirlendi. 6 Haziran Pazar günü oynanan final maçında Kozan Belediyespor'u 2-1 yenen Yeni İskenderunspor TFF 3. Lig'e çıkan son takım oldu.

Sivas 4 Eylül Belediyespor, Sancaktepe Gençlik ve Spor, Antalya Kepez Belediyespor ve Kırklarelispor daha önce TFF 3. Lige çıkmaya hak kazanmıştı.