2008-2009 Sezonu Bayanlar 2. Ligi Play-Off müsabakaları kuraları Türkiye Futbol Federasyonu İstanbul Beylerbeyi Tesisleri'nde çekildi. Kademe müsabakaları sonunda Play-Off gruplarında mücadele etmeke hak kazanan 11 takımın katıldığı kura çekiminde 4'er takımlı 2 ve 3 takımlı 1 grup oluşturuldu.

Bayanlar 2. Lig Play-Off grupları şu şekilde oluştu:

A Grubu	B Grubu	C Grubu
Adana İdmanyurduspor	Ümraniye Mevlana Lisesispor	Antalyaspor
Marmara Üniversitesispor	Gölcükspor	Gazikentspor
Turgutlu Belediyespor	Düvenciler Lisesispor	Malatya Gençlik ve Spor
Elitspor	Kdz. Ereğlispor

Üç tarafsız bölgede tek devreli lig usülüne göre oynanacak Play-Off maçları sonunda gruplarını 1. sırada tamamlayan 3 takım 2009-2010 Sezonunda Bayanlar 1. Ligi'ne terfi etmeye hakkını kazanacak. Grup ikincisi olan 3 takım ise daha sonra belirlenecek bir tarihte oynanacak ekstra Play-Off müsabakaları sonunda 2009-2010 Sezonunda Bayanlar 1. Lige çıkacak 4. takım olacak.